Fampiasana sy fitandremana ny fantsona ultrafiltration centrifuge
1) Mifidiana fantsona ultrafiltration mety.Mariho fa ny fonon'ny UF dia tsy mitovy amin'ny haavon'ny fandeferany amin'ny zavatra simika isan-karazany.Amin'ny ankapobeny, ny fantsona ultrafiltration miaraka amin'ny fihenan'ny lanjan'ny molekiola 10 kDa dia azo fidina miaraka amin'ny fanapahana lanja molekiola izay tsy tokony hihoatra ny 1/3 amin'ny lanjan'ny molekiolan'ny proteinina mahaliana, toy ny 35 kDa.Raha manodidina ny 10 kd ny lanjan'ny molekiolan'ny proteinina mahaliana, dia azo ampiasaina ny fantsona ultrafiltration miaraka amin'ny lanja molekiola tapaka 3 KD.
(2) Ny ultrafiltration, vao novidina, dia maina, miaraka amin'ny rano ultrapure ampiana alohan'ny fampiasana ary ny rano dia mandalo tanteraka amin'ny fonon-dranomandry, ranomandry na vata fampangatsiahana mialoha mangatsiaka mandritra ny minitra vitsivitsy.Araraka ny rano avy eo, izany hoe ny ranon-javatra proteinina, ary ohatrinona no ampiana, izay tsy mihoatra ny tsipika fotsy eo an-tampon'ny fantsona.Ny fandidiana dia maivana, ary ny fantsona ultrafiltration dia mila mangatsiaka mialoha amin'ny ranomandry alohan'ny hampidirana ny vahaolana proteinina.
3) Samy tokony hahatratra ny fifandanjana ny mass sy ny ivon'ny sinton'ny tany.Mariho fa tsy dia haingana loatra ny hafainganam-pandehan'ny fihodinana sy ny fanafainganana, raha tsy izany dia manimba mivantana ny membrane ultrafiltration.Natomboka ny ultrafiltration centrifugal (natao ho 4 degre ny centrifuge).Taorian'ny RPM ny centrifuges samy hafa niova ho g, dia hafa.Ny fanafainganana ny centrifuge dia namboarina ho faran'izay kely indrindra, nampihena ny tsindry amin'ny membrane.Mariho, aza hadino ny miala amin'ny centrifuge rehefa tonga any amin'ny hafainganam-pandehany ny centrifuge, na raha manana olana ianao dia tsy zakanao izany voalohany.Ny orientation ny membrane amin'ny spindle dia namboarina araka ny toromarika (angular centrifuge tranga dia membrane amin'ny axis perpendicular).Amin'ny fampiasana azo ampiharina, ny hafainganam-pandehan'ny fihodinana ankapobeny dia ambany noho ny ao amin'ny torolàlana, mba hanitatra ny fiainan'ny fantsona centrifuge.
3) Samy tokony hahatratra ny fifandanjana ny mass sy ny ivon'ny sinton'ny tany.Mariho fa tsy dia haingana loatra ny hafainganam-pandehan'ny fihodinana sy ny fanafainganana, raha tsy izany dia manimba mivantana ny membrane ultrafiltration.Natomboka ny ultrafiltration centrifugal (natao ho 4 degre ny centrifuge).Taorian'ny RPM ny centrifuges samy hafa niova ho g, dia hafa.Ny fanafainganana ny centrifuge dia namboarina ho faran'izay kely indrindra, nampihena ny tsindry amin'ny membrane.Mariho, aza hadino ny miala amin'ny centrifuge rehefa tonga any amin'ny hafainganam-pandehany ny centrifuge, na raha manana olana ianao dia tsy zakanao izany voalohany.Ny orientation ny membrane amin'ny spindle dia namboarina araka ny toromarika (angular centrifuge tranga dia membrane amin'ny axis perpendicular).Amin'ny fampiasana azo ampiharina, ny hafainganam-pandehan'ny fihodinana ankapobeny dia ambany noho ny ao amin'ny torolàlana, mba hanitatra ny fiainan'ny fantsona centrifuge.
(4) Rehefa mifantoka amin'ny 1ml ambiny dia makà vahaolana buffer 50ul, ampio 10ul mikoriana ary jereo raha misy loko manga, ho fitsarana raha tsy misy proteinina ny fantsona ultrafiltration.Raha mitete ny fantsona, avereno averina ny sosona ambony ary mikoriana ao anaty fantsona vaovao hanombohana ultrafiltration.Mba hamaritana mazava tsara raha tsy hita ny fantsona, centrifuge mandritra ny 10min miaraka amin'ny 5mgml BSA alohan'ny hidirana, mandehana amin'ny lakaoly proteinina, na Bradford crude assay, ary tohizo amin'ny fampidirana ny vahaolana proteinina mivondrona (izay miasa amin'ny ranomandry ary manakana ny proteinina tsy ho mafana) mandra-pahafatiny. nampiana ny concentrate rehetra.Mitandrema mandritra ny centrifugation raha misy rotsak'orana ny proteinina, mitarika amin'ny fanakatonana fantsona.Raha misy ny rotsak'orana, dia fantaro raha ny antony manokana mahatonga ny rotsak'orana dia ny fatran'ny proteinina tafahoatra na ny buffer tsy mety;Ny voalohany dia azo voavaha amin'ny alalan'ny ultrafiltration ny fantsona ultrafiltration maro miaraka, ny fampihenana ny fifantohana, ary ny farany amin'ny alalan'ny fifanakalozana buffer vahaolana samy hafa mandra-tsy rotsak'orana ny proteinina mitranga.
(4) Rehefa mifantoka amin'ny 1ml ambiny dia makà vahaolana buffer 50ul, ampio 10ul mikoriana ary jereo raha misy loko manga, ho fitsarana raha tsy misy proteinina ny fantsona ultrafiltration.Raha mitete ny fantsona, avereno averina ny sosona ambony ary mikoriana ao anaty fantsona vaovao hanombohana ultrafiltration.Mba hamaritana mazava tsara raha tsy hita ny fantsona, centrifuge mandritra ny 10min miaraka amin'ny 5mgml BSA alohan'ny hidirana, mandehana amin'ny lakaoly proteinina, na Bradford crude assay, ary tohizo amin'ny fampidirana ny vahaolana proteinina mivondrona (izay miasa amin'ny ranomandry ary manakana ny proteinina tsy ho mafana) mandra-pahafatiny. nampiana ny concentrate rehetra.Mitandrema mandritra ny centrifugation raha misy rotsak'orana ny proteinina, mitarika amin'ny fanakatonana fantsona.Raha misy ny rotsak'orana, dia fantaro raha ny antony manokana mahatonga ny rotsak'orana dia ny fatran'ny proteinina tafahoatra na ny buffer tsy mety;Ny voalohany dia azo voavaha amin'ny alalan'ny ultrafiltration ny fantsona ultrafiltration maro miaraka, ny fampihenana ny fifantohana, ary ny farany amin'ny alalan'ny fifanakalozana buffer vahaolana samy hafa mandra-tsy rotsak'orana ny proteinina mitranga.
(5) Ny dingana vitsivitsy voalohany dia ampiasaina mba hifantoka ny proteinina, ary raha ny buffer dia hovana, dia ampio moramora buffer vaovao (ultrafiltration amin'ny alalan'ny 0.22um ultrafiltration membrane) ho eo amin'ny 1ml ny totalin'ny proteinina, ary reconcentrate amin'ny tokony ho 1ml ho telo. fotoana nifanesy, miaraka amin'ny boky farany mifantoka farany miankina amin'ny fitanan'i proteinina irina, amin'ny ankapobeny tsy mihoatra ny 500ul, fa koa ao anatin'ny 200ul.Mahatratra 1000 × na mihoatra amin'ny fotoana intelo, amin'ny ankapobeny dia mitovy amin'ny fiovan'ny buffer, araka ny kajy amin'ny 10 × na mihoatra ny fampitomboana boky isaky ny mandeha.
(5) Ny dingana vitsivitsy voalohany dia ampiasaina mba hifantoka ny proteinina, ary raha ny buffer dia hovana, dia ampio moramora buffer vaovao (ultrafiltration amin'ny alalan'ny 0.22um ultrafiltration membrane) ho eo amin'ny 1ml ny totalin'ny proteinina, ary reconcentrate amin'ny tokony ho 1ml ho telo. fotoana nifanesy, miaraka amin'ny boky farany mifantoka farany miankina amin'ny fitanan'i proteinina irina, amin'ny ankapobeny tsy mihoatra ny 500ul, fa koa ao anatin'ny 200ul.Mahatratra 1000 × na mihoatra amin'ny fotoana intelo, amin'ny ankapobeny dia mitovy amin'ny fiovan'ny buffer, araka ny kajy amin'ny 10 × na mihoatra ny fampitomboana boky isaky ny mandeha.
Fotoana fandefasana: Nov-09-2022