PCR, dia ny fanehoan-kevitry ny rojo polymerase, izay manondro ny fampidirana dNTP, Mg2+, anton-javatra elongation sy ny fanamafisam-peo amin'ny rafitra eo ambanin'ny catalysis ny ADN polymerase, amin'ny fampiasana ny ADN ray aman-dreny ho môdely sy ny primer manokana ho toy ny fiandohan'ny fanitarana, Amin'ny alalan'ny dingan'ny denaturation, annealing, fanitarana, sns., ny dingan'ny famerenana amin'ny vitro ny ADN strand zanakavavy mifameno amin'ny ADN modelin'ny ray aman-dreny dia afaka mampitombo haingana sy manokana izay ADN kendrena in vitro.
1. Hot Start PCR
Ny fotoana fanombohana ny fanamafisam-peo amin'ny PCR mahazatra dia tsy ny fametrahana ny milina PCR ao amin'ny milina PCR, ary avy eo dia manomboka manamafy ny programa.Rehefa vita ny fanamafisana ny rafitra dia manomboka ny fanamafisam-peo, izay mety hiteraka fanamafisam-peo tsy voafaritra, ary ny PCR mafana dia afaka mamaha ity olana ity.
Inona no atao hoe PCR fanombohana mafana?Aorian'ny fiomanana ny rafitry ny fanehoan-kevitra dia avoaka amin'ny hafanana ambony (matetika mihoatra ny 90 ° C) ny modifier anzima mandritra ny dingan'ny fanafanana voalohany amin'ny fihetsiketsehana na "fiantombohan'ny hafanana", mba hihetsika ny polymerase ADN.Ny fotoana fampahavitrihana marina sy ny mari-pana dia miankina amin'ny toetran'ny polymerase ADN sy ny mpanova fanombohana mafana.Ity fomba ity dia mampiasa indrindra indrindra ny modifiers toy ny antibody, ligne affinity, na modifiers simika mba hanakanana ny asan'ny polymerase ADN.Koa satria voasakana amin'ny mari-pana ao amin'ny efitrano ny asan'ny polymerase ADN, ny teknolojia fanombohana mafana dia manome fahafaham-po lehibe amin'ny fanomanana rafitra fanehoan-kevitra PCR marobe amin'ny mari-pana amin'ny efitrano nefa tsy manao sorona ny maha-tokana ny fanehoan-kevitra PCR.
2. RT-PCR
RT-PCR (Reverse transcription PCR) dia teknika andrana amin'ny fandikana mivadika avy amin'ny mRNA mankany amin'ny cDNA ary ampiasaina ho modely amin'ny fanamafisana.Ny fomba andrana dia ny manala ny RNA manontolo ao amin'ny tavy na ny sela aloha, mampiasa Oligo (dT) ho primer, mampiasa transcriptase mivadika ho synthesize ny cDNA, ary avy eo dia ampiasao ny cDNA ho modely amin'ny fanamafisam-peo PCR hahazoana ny fototarazo kendrena na hamantarana ny fanehoana ny fototarazo.
3. Fluorescent quantitative PCR
Fluorescent quantitative PCR (Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR) dia manondro ny fomba fampidirana vondrona fluorescent amin'ny rafitra fanehoan-kevitry ny PCR, amin'ny fampiasana ny fanangonan-tsonia fluorescent mba hanaraha-maso ny fizotran'ny PCR manontolo amin'ny fotoana tena izy, ary amin'ny farany dia mampiasa ny curve mahazatra mba handinihana ny môdely.Ny fomba qPCR fampiasa matetika dia misy ny SYBR Green I sy TaqMan.
4. PCR nested
Ny nested PCR dia manondro ny fampiasana andiany PCR roa ho an'ny fihodinana roa amin'ny fanamafisana PCR, ary ny vokatra fanamafisam-peo amin'ny fihodinana faharoa dia ny sombin'ny fototarazo kendrena.
Raha tsy mifanandrify amin'ireo primera roa voalohany (primer ivelany) no mahatonga ny vokatra tsy voafaritra tsara hohamafisina, dia kely dia kely ny fahafahan'ny faritra tsy voafaritra mitovy amin'ny fahafantaran'ny mpivady faharoa sy ny fanohizana ny fanamafisana, noho izany ny Ny fanamafisam-peo ataon'ny mpivady faharoa, dia nohatsaraina ny maha-tokana ny PCR.Ny tombony iray amin'ny fanaovana PCR fihodinana roa dia ny manampy amin'ny fanamafisana ny vokatra ampy avy amin'ny ADN manomboka voafetra.
5. PCR midina
Touchdown PCR dia fomba iray hanatsarana ny fahasamihafan'ny fihetsiky ny PCR amin'ny alàlan'ny fanitsiana ny mari-pamantarana tsingerin'ny PCR.
Ao amin'ny PCR touchdown, ny mari-pana fanerena ho an'ny tsingerina vitsivitsy voalohany dia apetraka amin'ny mari-pahaizana vitsivitsy ambonin'ny maripana fanerena ambony indrindra (Tm) an'ny primers.Ny mari-pana annealing avo kokoa dia mety hampihena ny fanamafisana tsy voafaritra manokana, fa amin'ny fotoana iray ihany, ny mari-pana annealing ambony dia hampitombo ny fisarahana ny primers sy ny filaharana kendrena, ka hampihena ny vokatra PCR.Noho izany, ao amin'ny tsingerina vitsivitsy voalohany, ny mari-pana annealing dia matetika apetraka hidina amin'ny 1 ° C isaky ny tsingerina mba hampitombo ny votoatin'ny fototarazo kendrena ao amin'ny rafitra.Rehefa ampidinina amin'ny mari-pana tsara indrindra ny mari-pana annealing dia tazonina ho an'ny tsingerina sisa.
6. PCR mivantana
Ny PCR mivantana dia manondro ny fanamafisana ny ADN kendrena mivantana avy amin'ny santionany tsy mila fitokana-monina sy fanadiovana asidra nokleika.
Misy karazany roa ny PCR mivantana:
fomba mivantana: maka santionany kely ary ampio mivantana amin'ny PCR Master Mix mba hamantarana ny PCR;
fomba famoretana: rehefa avy naka santionany ny santionany dia ampio amin'ny lysate, lyse mba hamotsorana ny genome, maka kely lysed supernatant ary ampio amin'ny PCR Master Mix, manao PCR famantarana.Ity fomba fiasa ity dia manamora ny fizotran'ny andrana, mampihena ny fotoana an-tanana ary misoroka ny fahaverezan'ny ADN mandritra ny dingana fanadiovana.
7. SOE PCR
Ny fametahana fototarazo amin'ny PCR fanitarana mifanindry (SOE PCR) dia mampiasa primer miaraka amin'ny tendrony mifameno mba hahatonga ny vokatra PCR ho lasa rojo mifamatotra, ka amin'ny fanehoan-kevitra manamafy manaraka, amin'ny alàlan'ny fanitarana ireo rojo mifanindry, loharano samihafa amin'ny teknika iray izay ampifanitsiana ireo sombintsombin'ny amplification. ary mifamatotra.Ity teknôlôjia ity dia manana torolàlana fampiharana roa lehibe amin'izao fotoana izao: fananganana fototarazo fusion;mutation amin'ny tranokalan'ny fototarazo.
8. IPCR
Ny PCR Inverse (IPCR) dia mampiasa primer mifameno mivadika mba hanamafisana ny sombintsombin'ny ADN ankoatry ny primer roa, ary manamafy ny filaharana tsy fantatra amin'ny lafiny roa amin'ny sombiny ADN fantatra.
Ny IPCR dia natao voalohany hamaritana ny filaharan'ireo faritra tsy fantatra mifanakaiky, ary matetika ampiasaina amin'ny fandalinana ny filaharan'ny mpanentana fototarazo;Oncogenic chromosomal rearrangements, toy ny fototarazo fusion, translocation sy transposition;ary ny fampidirana fototarazo viriosy, dia matetika ampiasaina ankehitriny.
9. dPCR
Ny PCR nomerika (dPCR) dia teknika amin'ny fanisana tanteraka ny molekiola asidra nokleika.
Misy fomba telo amin'izao fotoana izao hamaritana ny molekiolan'ny asidra nokleika.Ny fotométrie dia mifototra amin'ny fandraisana ny molekiola asidra nokleika;Ny PCR (Real Time PCR) dia mifototra amin'ny sanda Ct, ary ny sanda Ct dia manondro ny laharan'ny tsingerina mifandraika amin'ny sanda fluorescence azo tsikaritra;Ny PCR nomerika dia ny teknolojia Quantitative farany mifototra amin'ny fomba PCR molekiola tokana amin'ny fanisana ny asidra nokleika dia fomba fatra tanteraka.
Fotoana fandefasana: Jun-13-2023